In utero elektroporáció

2022. március 20. vasárnap
Címkék: Módszerek

Specifikus neuronpopulációk jelölésére vagy génexpressziójuk szabályozására (túlexpresszióval vagy siRNS csendesítéssel) az in utero elektroporáció módszerét használjuk.

A módszer előnye a gyorsaság és a költséghatékonyság a hagyományos, genetikailag módosított állatmodellek létrehozásával szemben, amelyek általában lassúak és nagyon drágák. A vizsgálni kívánt gén mRNS-ét (gain-of-function) vagy RNSi-t (loss-of-function) kódoló plazmidokat használunk, amelyeket az E12-E16-os embriók telencephalikus kamrájába injektálunk, majd az embriók fejéhez tartott elektródákon keresztül rövid, alacsony feszültségű (30-50V) elektromos impulzusokat alkalmazunk. Az egyenáram hatására a plazmid átjut a proliferáló kamrai zóna prekurzor sejtekbe, majd belép e sejtek utódaiba (neuronok vagy progenitor sejtek). Ha egy fluoreszcens fehérjét tartalmazó plazmidot, vagy alternatívaként a cDNS GFP- vagy mCherry-jelölt változatát is befecskendezzük, könnyen nyomon követhetjük a transzfektált progenitor és leánysejtjeinek sorsát.