Patch-clamp elektrofiziológia
A molekuláris biológiai és anatómiai kísérleteink során feltárt jelátviteli útvonalak funkcionális jelentőségének vizsgálatához teljes sejtes patch-clamp méréseket végzünk akut agyi szelet preparátumokban.
Az akut és organotipikus szeletek készítéséhez a legújabb Leica 1200S Vibratome-ot használjuk. Felszerelésünket az I alakú Nikon FN1 függőleges mikroszkópra építettük, és egy Supertech rezgéscsillapító asztalon helyeztük el. Vízimmerziós 40x CFI Apo objektívet használunk, NA 0,8-as NA-val és 3,5 mm-es munkatávolsággal. Mintáink kontrasztjának fokozására infravörös DIC-et használunk, a kiválasztott neuronok patchelését pedig egy Hamamatsu közeli infravörös ½ hüvelykes CCD-kamera (C7500-51) segíti. Egy epifluoreszcens tartozék lehetővé teszi a genetikailag kódolt fluoreszcens markerekkel ellátott sejtek vizualizálását is, amelyek segítenek az egyes projektekhez szükséges specifikus sejttípusok azonosításában és megcélzásában. A patch-clamp elektródákat egy Sutter P-1000 vízszintes pipettahúzóval húzzák. Két Luigs & Newmann mikromanipulátor rendszer segít páros felvételek vagy egysejtes felvételekkel kombinált extracelluláris stimuláció elvégzésében. Az egész sejtes felvételeket feszültség- vagy áram-clamp üzemmódban végezzük az Axon Instruments Axoclamp 2B erősítőjével. Egy második, majdnem azonos berendezés is a rendelkezésünkre áll az intézetben található Fénymikroszkóp Központban. Ez a berendezés egy Nikon-C1 konfokális tartozékkal rendelkezik, és a preparátumainkban a preszinaptikus kalcium tranzienseket és a posztszinaptikus válaszokat egyszerre tudjuk monitorozni. Ezen elektrofiziológiai berendezések segítségével szeretnénk hozzájárulni annak megértéséhez, hogy a különböző endokannabinoid jelátviteli útvonalak hogyan szabályozzák a szinaptikus plaszticitás bizonyos formáit.
